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简略信息一览:
- 1、PCR的控制技术
PCR的控制技术
1、对温度的控制是为了实现体内DNA增值的过程。变性是为了让模板在高温(94°C)下解链为单链模板,退火(30-60)是为了让引物在低温下分别与变性的模板相结合,延伸(65-75)是由耐热DNA聚合酶的最适温度决定的,以引物为起点,沿着模板5‘-3’方向延伸。
2、⑴PCR技术的基本原理:该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链。
3、应用PCR扩增技术可将很少的病原微生物核酸扩增放大,可以用于病害的早期诊断,也可产生大量的核酸探针,用于病害的诊断。病害的防治通常是预防大于治疗。浓度偏低的病毒病标样的准确诊断和检测对病害的有效控制非常重要。
4、PCR技术是模拟体内DNA的天然***过程,在体外扩增DNA分子的一种分子生物学技术,主要用于扩增位于两段已知序列之间的DNA区段。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增2倍。
5、因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外***。 但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展。
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